南宫28NG相信品牌力量推出的人套细胞淋巴瘤细胞REC1培养说明书，旨在为科研人员提供明确的细胞培养指导。以下是细胞培养的详细步骤与注意事项，帮助您更好地处理和培养REC1细胞。

一、细胞培养条件

- 细胞名称：人套细胞淋巴瘤细胞REC1
- 生长特性：悬浮生长
- 冻存条件：无血清冻存液
- 培养体系：1640培养基 + 10%胎牛血清(FBS) + 1%青霉素/链霉素(P/S)
- 传代方法：第一次建议按1:2比例传代，建议每两天更换培养液。

在进行传代时，建议使用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡对比培养；若对比培养效果不理想，建议直接购买南宫28NG的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应在细胞状态良好时填满完全培养液并封好瓶口，这是确保细胞最佳运输状态的方法。在处理细胞前，请用75%酒精消毒细胞瓶，随后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时。之后，通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议拍摄40x、100x、200x各一张）；前三天的照片是售后重要依据，未提供照片默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请收集瓶内培养液至离心管中，留5ml完全培养基置于37℃、5% CO2环境中；若细胞密度超过80%，则可进行传代。传代具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液于培养瓶中，置于37℃孵箱消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，待细胞大部分变圆后迅速轻敲培养瓶，加入超过5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），各瓶补充5-8ml新的完全培养基，最后放入37℃、5% CO2培养箱中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶面积达到80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，并观察，待细胞回缩后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 除去上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱，若需后期转入液氮罐，应在-80℃下存放至少24小时。

c. 细胞复苏

1. 从液氮取出冻存管，用防护面具进行操作，迅速置入37℃水浴解冻，直至无冰晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能不牢固，会出现脱落的情况，这是正常现象。如发现大量脱离，可将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养。沉淀加1-2ml胰酶，轻轻吹打并重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止消化，再进行离心、重悬，并按1:2比例分瓶传代。

五、售后条款

- 细胞出现问题时的重发情况：细胞在运输中出现丢失、瓶破损、培养液漏液等情况，均可重发；细胞污染请在收到48小时内提供真实结果；常温运输细胞在静置24小时后或干冰运输细胞复苏24小时内，若细胞存活率低（需提供清晰照片），可重发。
- 不予重发的情况：如细胞污染由客户造成，或因客户操作不当导致细胞状态不良、使用非推荐培养体系等，均不予重发。若在收到2天内未及时反馈，也会视为产品合格。

南宫28NG相信品牌力量，希望本说明书能帮助您更好地培养和应用REC1细胞，以实现您的科研目标。