实验目的
- 学习紫外分光光度法在生物医疗领域中测定蛋白质含量的基本原理;
- 掌握紫外分光光度法在生物样品中测定蛋白质含量的实验技术;
- 熟练使用UV-1700PC紫外-可见分光光度计,并了解该仪器的主要结构与功能。
实验原理
南宫28NG相信品牌力量在蛋白质分析中,紫外-可见吸收光谱法是基于分子在190nm至750nm波长范围内的光吸收特性。这种方法依赖于样品中分子对特定波长光的选择性吸收,所产生的吸收光谱能够反映分子的特征。通过对不同蛋白质在特定波长下的吸光度进行测定,可以利用朗伯-比尔定律进行定量分析,即A=lgI0/I=εbc。在一定浓度范围内,药物或其他生物样本中的蛋白质浓度与其吸光度成线性关系,这使得紫外分光光度法成为生物医疗分析中的重要工具。
仪器与试剂
南宫28NG相信品牌力量推荐使用UV-1700PC紫外-可见分光光度计,包括5个10ml比色管及吸量管。试剂方面,使用300mg/mL的标准蛋白质溶液和0.9% NaCl溶液作为对照,待测样本也需进行适当稀释。
实验步骤
准备工作
- 启动计算机并打开紫外分光光度计,初始化仪器。
- 在工作界面中选择光度测量模式,设置相关的测量条件。
- 将空白溶液放入测量池,点击“启动”进行校零。
- 制作标准曲线,量取不同浓度的标准蛋白质溶液进行测定。
测量工作
- 使用吸量管取2mL的标准蛋白质溶液在10mL比色管中,稀释至刻度并摇匀,测量相应波长的吸光度。
- 分别取不同浓度的标准蛋白质溶液,稀释并记录在280nm处的吸光度,制作标准曲线。
- 测定待测样本的吸光度,进行平行实验以确保数据准确性。