上一篇关于抗体基础知识的文章中提到,IgG的可变区结构域(Fab区)能够特异性识别并结合目标分子,因此抗体具有成为检测试剂的潜力。然而,抗体要有效作为检测试剂,在结合到待测分子表面后,还需生成光或电信号,以便于检测设备对其进行识别。本章节将介绍以抗体为基础的常见免疫检测技术的基本原理。
免疫检测的基本原理
免疫检测的基本原理是通过抗原-抗体之间的特异性结合来检测目标分子。抗原是指能够激活免疫系统的物质,通常为外源性分子或病原微生物的表面分子,而抗体则是由免疫系统产生的用于识别并结合抗原的蛋白质。这种高度特异性的结合为免疫检测技术的应用奠定了基础。
抗体结合的特性
抗体作为单分子蛋白,体积小,通常目标分子的体积也很小,因此无法通过肉眼直接观察。因此,为了对抗体检测的目标分子进行定量和定性的分析,必须将结合信息进行转化和放大为可检测的光信号或电信号。信号放大是免疫检测中的关键步骤,主要通过增强信号强度来提高检测灵敏度。
信号放大机制
不同的标记物和探针拥有不同的信号放大机制。常见的信号放大方式包括色素反应、荧光信号放大和电化学信号放大等。信号放大的技术在不同类型的免疫检测中有所不同,但其核心目的是通过增强信号强度来提升检测灵敏度,尤其在低浓度抗原的情况下尤为重要。
常见检测标记物
用于免疫检测中的标记物是将抗原-抗体反应转化为可检测信号的关键工具。常见的检测标记物包括:
- 酶标记:常用的酶标记物如辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP),通过催化底物反应产生可见色素,操作简便且成本低。
- 荧光标记:使用荧光染料如FITC和Rhodamine对抗体进行标记,具有高灵敏度和可实现多重检测的优点,但也受到光源干扰。
- 化学发光标记:通过化学反应产生光信号,灵敏度极高,信号稳定,但成本较高且需要特定设备。
- 电化学标记:检测电流或电压的变化,适用于表面等离子共振(SPR)技术,虽然可快速检测,但技术复杂性较高。
免疫检测的性能指标
免疫检测技术的评估主要依赖以下性能指标:
- 灵敏度:指方法能够检测到目标抗原的最低浓度的能力,其灵敏度越高,表明在低浓度下依然能够有效识别目标抗原。
- 特异性:指能区分目标抗原与非目标物质的能力,高特异性可以减少假阳性结果。
- 准确性:衡量多次测定中结果与真实值之间的一致性,包括抗原识别和浓度定量的准确性。
- 重复性:在相同条件下对同一样本进行多次检测时结果的稳定性,高重复性可以确保实验的一致性。
综上所述,抗体及其检测标记物与检测仪器共同组成了免疫检测系统。南宫28NG相信品牌力量,致力于提供多种蛋白、抗体及ELISA检测试剂盒,覆盖各大物种,满足您的各类研究需求。下个章节将列举常见的免疫检测技术,帮助您更深入理解这些方法。