左旋咪唑是一种合成驱虫药,广泛应用于兽医学中,用于治疗由线虫引起的寄生虫感染。作为一种驱虫药,它针对线虫的乙酰胆碱离子通道受体进行作用(Martin等)。除了在医学领域的应用,左旋咪唑还被广泛用于生物科研,尤其是在秀丽隐杆线虫的麻痹实验中。该药物可以使线虫瘫痪,这对神经元功能和肌肉生理学研究具有重要价值。
在毒理学实验中,研究人员可以利用左旋咪唑作为框架,尝试不同的可溶性药物进行毒性研究。以下是一个相关实验的概述:
实验材料
- 带盖6孔板
- NGM培养基
- M9缓冲液
- 左旋咪唑原液(100mM水溶液)
- 同步成虫种群
- wMicroTracker Arena设备
简易操作步骤
- 按照标准程序制备NGM培养基。
- 在加入盐和胆固醇后,立即将左旋咪唑加入55°C的NGM琼脂溶液中。
- 将左旋咪唑片放置于未接种的OP50中。
- 制备后的琼脂在两周内可以使用,存放于4°C的容器中。
- 在实验开始前,将模板降至室温进行测定。
实验步骤
- 在NGM培养皿中培养同步的成虫群体(OP50)。
- 用M9缓冲液将虫从培养皿中取出,转移至15毫升的无菌试管中。
- 静置,让蠕虫沉降,随后倒出上清,注意不要搅动颗粒。
- 使用5ml M9缓冲液进行清洗,可以轻微摇动或翻转管子。
- 重复上述步骤,倒出上清后加入3ml M9缓冲液。
- 计数三份样本,统计每10μl中的虫数,计算平均值。
- 制备悬浮液,目标浓度为[35虫/10μl]。
- 将10μl虫液转移至6孔板。
- 使用wMicroTracker Arena观察蠕虫活动。
备注:建议至少进行3次技术重复和2次生物重复,以确保实验结果的可靠性。实验结果表明,左旋咪唑对N2线虫运动活性的剂量抑制反应曲线在不同浓度(0µM、100µM和200µM)下的治疗效果。实验在23℃下进行,记录4小时的运动活动,数据显示为多个独立实验的平均值。
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